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使用凝膠滲透色譜時要注意這些操作

更新時間:2023-03-07      點擊次數(shù):935
  凝膠滲透色譜是一種分離大分子化合物的色譜技術,通常應用于聚合物、蛋白質等在生物、醫(yī)藥領域中的分析和純化。其原理基于溶液中溶劑分子能滲透到凝膠顆粒內部,但較大分子則無法進入顆粒內部而被阻滯,因而差異化大小分子之間的滲透速率,從而達到分離成分的目的。
  凝膠滲透色譜(GPC)是以有機溶劑為流動相的,用水做流動相的叫凝膠過濾色譜(GLC),兩者都是分子排阻色譜。
  用水做流動相的凝膠色譜,通常用來分析蛋白質、多肽(一般用buffer做流動相),如果你想做這方面的分析,成本可能比較高,主要是柱子很貴,比較常見的如TSK的柱子,一般都要上萬,柱子比較嬌氣,很容易損壞。
  凝膠滲透色譜可以用于蛋白質分離、聚合物分離,分離大分子和小分子的混合物等等。在蛋白質分離方面,凝膠滲透色譜可以分離不同分子量的蛋白質。其作用原理是在凝膠列的孔隙中形成一層分子層,與透過孔隙的大分子相互作用,使得大分子在凝膠列中滯留,而較小的分子則在凝膠中滲透更快,從而被更快地分離出來。
  在使用凝膠滲透色譜的過程中,一些要求需要考慮。首先,正確的凝膠選擇可以影響分離的效果。例如,根據(jù)需要分離的大小范圍,選擇不同孔徑的凝膠;另外,選擇適當?shù)木彌_液和pH值,以及一定溫度和流速,可以增加分離效應和防止樣品的分解或退火。此外,也需要考慮環(huán)境安全因素,例如使用比較稀有的防腐劑,使用過程中避免直接接觸諸如有機溶劑等易燃易爆物質可能存在的風險。因此,使用凝膠滲透色譜要求具有較高的實驗室安全意識和操作技能。
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