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使用凝膠滲透色譜時(shí)要注意這些操作

更新時(shí)間:2023-03-07      點(diǎn)擊次數(shù):866
  凝膠滲透色譜是一種分離大分子化合物的色譜技術(shù),通常應(yīng)用于聚合物、蛋白質(zhì)等在生物、醫(yī)藥領(lǐng)域中的分析和純化。其原理基于溶液中溶劑分子能滲透到凝膠顆粒內(nèi)部,但較大分子則無(wú)法進(jìn)入顆粒內(nèi)部而被阻滯,因而差異化大小分子之間的滲透速率,從而達(dá)到分離成分的目的。
  凝膠滲透色譜(GPC)是以有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的,用水做流動(dòng)相的叫凝膠過(guò)濾色譜(GLC),兩者都是分子排阻色譜。
  用水做流動(dòng)相的凝膠色譜,通常用來(lái)分析蛋白質(zhì)、多肽(一般用buffer做流動(dòng)相),如果你想做這方面的分析,成本可能比較高,主要是柱子很貴,比較常見(jiàn)的如TSK的柱子,一般都要上萬(wàn),柱子比較嬌氣,很容易損壞。
  凝膠滲透色譜可以用于蛋白質(zhì)分離、聚合物分離,分離大分子和小分子的混合物等等。在蛋白質(zhì)分離方面,凝膠滲透色譜可以分離不同分子量的蛋白質(zhì)。其作用原理是在凝膠列的孔隙中形成一層分子層,與透過(guò)孔隙的大分子相互作用,使得大分子在凝膠列中滯留,而較小的分子則在凝膠中滲透更快,從而被更快地分離出來(lái)。
  在使用凝膠滲透色譜的過(guò)程中,一些要求需要考慮。首先,正確的凝膠選擇可以影響分離的效果。例如,根據(jù)需要分離的大小范圍,選擇不同孔徑的凝膠;另外,選擇適當(dāng)?shù)木彌_液和pH值,以及一定溫度和流速,可以增加分離效應(yīng)和防止樣品的分解或退火。此外,也需要考慮環(huán)境安全因素,例如使用比較稀有的防腐劑,使用過(guò)程中避免直接接觸諸如有機(jī)溶劑等易燃易爆物質(zhì)可能存在的風(fēng)險(xiǎn)。因此,使用凝膠滲透色譜要求具有較高的實(shí)驗(yàn)室安全意識(shí)和操作技能。
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